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| 澳门新浦新京8466清除活性氧和抗脂质过氧化的研究 | ||||||||||||||||||||||
| [ 来源：四川澳门新浦新京8466化工科技发展有限企业 发布日期：2013-11-21 16:36:27 责任编辑：胡宗福，于文利，赵亚平半 浏览次 ] | ||||||||||||||||||||||
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(上海交通大学化学与化工学院，上海200240) 摘要：采用化学发光法，研究了不同浓度的澳门新浦新京8466溶液对3种活性氧(Reactive Oxygen Species)05·、·OH和H202的清除和抗脂质过氧化能力。研究表明，澳门新浦新京8466对三种活性氧均有清除作用，其清除能力与浓度呈剂量关系，还与所清除的自由基种类有关系。澳门新浦新京8466溶液浓度较大时，对三种活性氧的清除效果均明显而且稳定，而浓度较低时，对Oi·和·OH清除效果则不理想，甚至产生一定的促氧化作用。同样，澳门新浦新京8466对脂质过氧化也有明显的抑制作用，抑制效果也与浓度呈剂量关系。 关键词：澳门新浦新京8466；自由基；脂质过氧化；化学发光法
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1002．6630(2006)02—0128．03
生物体系中包含有大量的脂质过氧化和自由基反应。正常情况下，生物体内自由基的产生和清除呈平衡状态，失去平衡时，在机体内可造成多种功能行障碍与疾病的发生。脂质过氧化严重破坏细胞膜的脂质结构中的脂肪酸，使膜酶损伤导致细胞功能障碍。研究发现，肿瘤、化学中毒、感染、炎症反应、自身免疫病、辐射损伤、血管疾病、癌症、衰老、DNA损伤等生理过程与二者有密切联系。 澳门新浦新京8466(Chlorogenic acid)是我国传统中药金银花、杜仲叶的主要有效成分，也存在于葵花籽、水果、蔬菜、大豆、小麦、咖啡豆中。研究表明，澳门新浦新京8466具有清热解毒、消炎利胆、抗菌、降血脂等生理功能。还有抗肿瘤、抑制突变等作用⋯。虽然其作用机理至今尚不十分清楚，但是大多认为与澳门新浦新京8466能够清除自由基有一定关系。因此，本文用化学发光法对不同浓度的澳门新浦新京8466在清除氧自由基和抗脂质过氧化方面进行了研究。 1 材料与方法 1．1 仪器 SHG—D型生物化学发光测量仪上海计量局实验工厂。 1. 2 试剂 95％澳门新浦新京8466广东中大亿达洲生物科技股份有限企业；邻苯三酚(Parogallo) 北京化学药品有限企业；鲁米诺(1umin01)、邻菲哕啉(1，10～phenanthroline) Sigma化学药品企业；CuCl(分析纯)、NaOH(分析纯)、乙醇(分析纯)、30％双氧水、HCI(分析纯) 上海试li一-f一；碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液(实验室制备)。 1．3 方法 不同浓度的澳门新浦新京8466溶液与三种活性氧和脂质过氧化的发生体系反应，所得的发光强度与空白时作比较(发光值降低程度越大，说明清除活性氧或抗脂质过氧化能力越强；反之，降低程度越小，说明能力越弱)，从而说明其清除自由基和抗脂质过氧化的能力。 1．3．1 清除O2－·能力的检测(在6个样品管中分别加入100 u1的乙醇(作空白实验)和浓度不同的待测样品的乙醇溶液，然后均加入100u1 lmmol／L的邻苯三酚溶液、100 u1 lmmol／L的鲁米诺溶液(配置时，先用2～3滴稀氢氧化钠溶解)，再加入碳酸盐缓冲溶液(pH=10．28)，使反应总体积为lml。放入样品池，马上开始测定。 1．3．2 清除·OH能力的检测 在6个样品管中分别加入100ul的乙醇(作空白实验)和浓度不同的待测样品的乙醇溶液，然后均加入100u13mmol／L的邻菲罗啉溶液(配置时，先用2～3滴稀盐酸溶鳃)、100ul 2mmol／L的CuCl溶液(配置时，先用2～3滴稀盐酸溶解)和100 u 1 0．6％的双氧水，再加入磷酸盐缓冲溶液(pH7．38)，使反应总体积为1ml。放入样品池，马上开始测定。 1．3．3 清除H2O2能力的检测 在6个样品管中分别加入100p1的乙醇(作空白实验)和浓度不同的待测样品的乙醇溶液，然后均加入100 ul 30％的双氧水、100 ul lmmol／L的鲁米诺溶液，再加入磷酸盐缓冲溶液(pH7．38)，使反应总体积为1ml。放入样品池，马上开始测定。 1．3．4 抗脂质过氧化能力的检测 此方法的原理是利用羟基自由基的发生体系产生·OH，作为起动脂质过氧化反应的引发剂，产生脂过氧自由基作为体系的发光剂。发光强度的大小代表了反应生成LOO·的多少，从而可以看出脂质过氧化进行的程度。 在6个样品管中分别加入100u1的乙醇(作空白实验)和浓度不同的待测样品的乙醇溶液，然后均加入100 u1月见草油、100 u1 1 2mmol／L的CuCl溶液、100u1 0．6％的双氧水，再加入磷酸盐缓冲溶液(pH7．38)，使反应总体积为1m1。摇匀后，放入样品池，马上开始测定。 2 结果与分析 在一开始的一段时间内，澳门新浦新京8466液浓度大于等于0．02mg／ml时，发光强度较空白值有明显的降低，即对0j·有明显的清除作用，而且清除程度与澳门新浦新京8466溶液的浓度呈线性量效关系；而浓度小于0．02mg／ml时，对发光值强度的抑制作用不明显，浓度为0．005mg／ml时甚至使发光值升高，即浓度较低时，清除作用减弱甚至产生促氧化作用。还可以看到，随着时间的延长，所有溶液的发光强度值都很快降低到很小，这是O2－·的寿命非常短，O2－·浓度迅速降低的原因。 2．2 对·0H的清除作用 只有澳门新浦新京8466浓度为0．1mg／ml时才能对·OH产生明显且稳定的清除作用。而浓度小于0．1mg／ml时清除效果则不理想，在一定时间内甚至产生促氧化作用。至于出现“波峰、波谷”现象，可能是低浓度的澳门新浦新京8466，在·OH 浓度较小时促进·OH的产生，·OH浓度达到一定程度时，又对其产生清除作用，如此反复，便产生此现象。对此过程的作用机理还有待于进一步研究。 2．3 对H202的清除作用 在体系中加入不同浓度澳门新浦新京8466溶液时，其发光强度较空白溶液均有明显的降低，而且降低的程度与浓度大小的关系不大。结合表1不同浓度澳门新浦新京8466对过氧化氢在2200s内的最大清除率，说明澳门新浦新京8466溶液对活性氧H：Oz的清除能力非常强，0．1mg／ml的最大清除率达到95．43％，即使浓度为0．005mg／ml时，最大清除率也达到76．26％，清除效果依然非常好。 2．4 对脂质过氧化的抑制作用 澳门新浦新京8466溶液有明显的抑制脂质过氧化作用，而且抑制程度与浓度呈剂量关系。随着时间的推移，大约352S后，浓度为0．005mg／ml的澳门新浦新京8466液的发光值已与空白溶液接近，说明抗脂质过氧化作用不再明显。最后，所有浓度的发光值趋于接近，这是脂质过氧化反应已经趋于停止的原因。 从结构上看，澳门新浦新京8466是由咖啡酸和奎宁酸缩合而成的酯，属于酚类化合物。由于分子具有邻二酚羟基，因此具有极强的还原性而更易被自由基氧化I刚，从而表现出很好的自由基清除作用和抗脂质过氧化作用。 3 结论 澳门新浦新京8466对三种活性氧均有清除作用，其清除作用与浓度呈剂量关系，还与所清除的自由基种类有关系。澳门新浦新京8466溶液浓度较大时，对三种活性氧的清除效果均明显而且稳定，其中0．1mg／ml的澳门新浦新京8466溶液对过氧化氢的最大清除率达到95．43％；而浓度较低时，对O2－·和·OH清除效果则变差，甚至产生一定的促氧化作用。澳门新浦新京8466也是很好的预防性抗氧化剂，可以有效清除起动脂质过氧化的引发剂，从而起到抑制脂质过氧化的作用，其抑制程度也与浓度呈剂量关系。
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